PCR, of polymerase chain reaction, is in technyk dy't brûkt wurdt om DNA-sekwinsjes te fersterkjen.It waard foar it earst ûntwikkele yn 'e jierren '80 troch Kary Mullis, dy't yn 1993 de Nobelpriis foar Skiekunde krige foar syn wurk.PCR hat de molekulêre biology revolúsjonearre, wêrtroch ûndersikers DNA kinne fersterkje fan lytse samples en it yn detail studearje.
PCR is in trijestapsproses dat plakfynt yn in termyske fytser, in masine dy't de temperatuer fan in reaksjegemik rap feroarje kin.De trije stappen binne denaturaasje, annealing en útwreiding.
Yn 'e earste stap, denaturaasje, wurdt it dûbelstrengige DNA ferwaarme ta in hege temperatuer (meastentiids om 95 ° C) om de wetterstofbânen te brekken dy't de twa stringen byinoar hâlde.Dit resulteart yn twa single-stringed DNA-molekulen.
Yn 'e twadde stap, annealing, wurdt de temperatuer ferlege nei sawat 55 ° C om de primers te annealjen oan' e komplementêre sekwinsjes op 'e single-stringed DNA.Primers binne koarte stikjes DNA dy't binne ûntworpen om oerien te kommen mei de sekwinsjes fan belang op it doel-DNA.
Yn 'e tredde stap, útwreiding, wurdt de temperatuer ferhege oant sawat 72 ° C om de Taq-polymerase (in soarte fan DNA-polymerase) in nije DNA-streng fan 'e primers te synthesisearjen.De Taq-polymerase is ôflaat fan in baktearje dy't yn waarme boarnen libbet en de hege temperatueren dy't brûkt wurde by PCR ferneare kinne.
Nei ien syklus fan PCR is it resultaat twa kopyen fan 'e doel DNA-sekwinsje.Troch de trije stappen te werheljen foar in oantal syklusen (typysk 30-40), kin it oantal kopyen fan 'e doel-DNA-sekwinsje eksponentiell wurde ferhege.Dit betsjut dat sels in lyts bedrach fan begjinnend DNA kin wurde fersterke om miljoenen of sels miljarden eksimplaren te produsearjen.
PCR hat in protte tapassingen yn ûndersyk en diagnostyk.It wurdt brûkt yn genetika om de funksje fan genen en mutaasjes te bestudearjen, yn forensika om DNA-bewiis te analysearjen, yn diagnoaze fan ynfeksjesykten om de oanwêzigens fan patogenen te detektearjen, en yn prenatale diagnoaze om te skermjen foar genetyske steuringen yn fetussen.
PCR is ek oanpast foar gebrûk yn in oantal fariaasjes, lykas kwantitative PCR (qPCR), wêrmei't de hoemannichte DNA kin wurde mjitten en omkearde transkripsje PCR (RT-PCR), dy't brûkt wurde kinne om RNA-sekwinsjes te fersterkjen.
Nettsjinsteande syn protte tapassingen hat PCR wol beheiningen.It fereasket kennis fan 'e doelsekwinsje en it ûntwerp fan passende primers, en it kin gefoelich wêze foar flater as de reaksjebetingsten net goed binne optimalisearre.Mei foarsichtich eksperiminteel ûntwerp en útfiering bliuwt PCR lykwols ien fan 'e machtichste ark yn molekulêre biology.
Post tiid: Febrewaris 22-2023